酶可以與一抗或二抗結合,用鏈黴親和素標記的酶也可以與用鏈黴親和素標記的一抗結合。
此外,對試劑盒結果的檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學發光或顯色檢測等。
現在測試的方式很多,可以根據自己的喜好來選擇。
一般檢測酶促反應的可溶性產物,抗體結合相應的酶(如常用的辣根過氧化物酶),而反應體係中加入相應的底物(如3,3-二氨基聯苯胺DAB)。
這種酶促反應產生特征顏色,可以用分光光度計檢測。堿性磷酸酶AP也是一種常見的酶。
免疫組化試劑盒的六大特點:
1.簡單:用簡單的一步反應代替常規方法的五個步驟。
2.快速:用1小時代替傳統方法的3-5小時。
3.通用性:適用於大多數一抗,不需要二抗反應。
4.靈敏度:具有與傳統方法相似的靈敏度。
5.重現性好:試劑盒的實驗結果重現性好。
6.經濟性:抗體和試劑可重複使用4-5次。
如果抗體之間有衝突或交叉反應,就會影響整個實驗的特異性。其中,抗體來源的相容性是交叉反應的一個因素。
雖然現在從動物身上買抗體比較容易,但還是要確認是否會有交叉反應。使用雙抗體夾心法檢測時,用於檢測的二抗得要對檢測一抗具有特異性,不能與捕獲抗體發生反應。