雙抗體夾心法是試劑盒中檢測抗原的常用方法：
1.將特異性抗體與固體載體連接形成固體抗體：洗滌除去未結合的抗體和雜質。
2.加入被檢標本：使其與固相抗體接觸反應一段時間，使標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原複合物。去除其他未結合的物質。
第三步，加入酶標抗體：將固相免疫複合物上的抗原與酶標抗體結合。完全清洗未結合的酶標抗體。此時，固體載體上酶的量與樣品中檢測物質的量正相關。
4.添加底物：夾心化合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顯色反應的程度，可以定性或定量測定抗原。
在臨床檢測中，該方法適用於檢測蛋白質等各種大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。隻要獲得針對被測抗原的外源抗體，就可以用來包被固相載體，製備酶偶聯物，建立這種方法。例如，抗體的來源是抗血清，用於包被和酶標記的抗體取自不同物種的動物。例如，在使用單克隆抗體時，一般選擇針對抗原上不同決定簇的兩種單克隆抗體，分別用於包被固相載體和製備酶偶聯物。這種雙位點夾心法具有較高的特異性，通過將被測標本與酶標抗體一起保溫，可用於一步檢測。
雙抗體夾心法檢測抗原的另一個注意點是類風濕因子(RF)的幹擾。RF是一種自身抗體，主要為IgM型，可與各種動物IgG的Fc片段結合。如果用於雙抗體夾心檢測的血清樣本中含有RF，可作為抗原成分，同時與固相抗體和酶標抗體結合，出現假陽性反應。f(ab’)或Fab片段用作酶結合物的試劑，由於去除了Fc片段，可以消除RF幹擾。
