一種良好的ATCC菌株有許多要求:
產量高,產量高,直接降低固定投資和單一生產成本。
產品質量符合要求。影響藥效和安全性的產品質量。
穩定性。在生產傳代過程中,產量和質量不應有較大變化。一般認為60-90PDL產量的變化不超過30%是可以接受的。
與生產過程相容。細胞株需適用於大規模生產和放大。
5.合規性。在構建ATCC細胞株的過程中,應避免接觸或使用可能影響安全性的動物源成分或其他成分,以確保單克隆。(clonality)以及整個過程的完整實驗記錄。
無菌操作ATCC細胞株注意事項?
操作前要洗手,進入超淨台後要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦一下。
2.點燃酒精燈,在火焰附近操作。耐熱物品應經常在火焰上燃燒。金屬器械不宜燃燒太久,以免退火,冷卻後夾住組織。吸收營養液的器具不能再燃燒,以免燃燒形成碳膜。
操作動作要準確、敏捷,但不能太快,以免空氣流動,增加汙染機會。
不能用手觸摸已經消毒器皿的工作部分,工作台上的物品要布局合理。
開瓶後要盡量保持45℃的斜位。
吸液的吸管等不能混合使用。
細胞處理ATCC菌株:
1)複蘇細胞:在37℃水浴中快速搖晃解凍含有1毫升細胞懸液的冷凍管,加入4毫升培養基,混合均勻。離心4分鍾,1000RPM條件下放棄上清液,加入1-2毫升培養基,吹勻。然後在培養瓶中加入所有細胞懸液進行一夜培養(或在10厘米皿中加入細胞懸液,加入約8毫升培養基,培養一夜)。第二天更換液體,檢查細胞密度。
細胞傳代:如果細胞密度達到80%-90%,就可以進行傳代培養。
對懸浮細胞而言,傳代可以參考下列方法:
方法一:收集細胞,在1000RPM條件下離心4分鍾,拋棄上清液,加入1-2mL培養液後吹勻,按1-2mL細胞懸液:2到1:5的比例分為新的含有8ml培養基的新皿或瓶子。
方法二:可以選擇半數換液的方法,拋棄半數培養基後,將剩餘細胞懸掛起來,將細胞懸液按1。:2到1:3的比例分為新的含有8ml培養基的新皿或瓶子。
3)ATCC細胞株的細胞凍結:當細胞生長良好時,可以凍結細胞。懸浮細胞凍結時,應收集細胞,在1000RPM條件下離心5分鍾,少量保存上清液(防止細胞吸收),加入一些新鮮培養基,加入冷凍管,在冷凍管中加入10%DMSO,然後冷凍。